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基于HPLC指纹图谱结合化学模式识别的黄蛭益肾胶囊质量控制(四) 模型区分参数R2Y=0.966
2025-05-13 02:53:44

2.7.3 偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)

为了进一步分析造成不同批次样品之间差异的基于结合化学成分,在PCA的指纹蛭益制基础上进行PLS-DA处理。模型区分参数R2Y=0.966,图谱模型预测参数Q2=0.91,化学表明建立的模式模型有效稳定。同样可将16批样品分为3类,识别肾胶进一步验证了HCA和PCA的囊质结果;以PLS-DA模型中重要性投影(VIP)值>1.0筛选不同批次样品间的差异性成分,VIP值的量控大小表明了对样品分类的贡献度的程度。据图5可知,基于结合共找到8个成分,指纹蛭益制分别为:13号峰(黄芪异黄烷苷)、图谱11号峰(人参皂苷Rg1)、化学7号峰(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、模式21号峰(7,识别肾胶2'-二羟基-3',4'-二甲氧基异黄烷)、6号峰(松脂醇二葡萄苷)、囊质16号峰(毛蕊异黄酮)、20号峰(芒柄花黄素)、4号峰(绿原酸),表明这8种成分对黄蛭益肾胶囊质量差异影响较大。8种成分分别来自于黄芪、三七、益母草、墨旱莲、杜仲,其中5个成分归属于君药黄芪药材,进一步说明黄芪药材对黄蛭益肾胶囊的质量影响较大。

3 讨论

本实验分别考察了超声提取方法的不同提取溶剂(50%甲醇、70%甲醇和甲醇)、提取时间(30、45、60 min)和提取料液比(1∶5、1∶10、1∶15)等影响因素,从提取的色谱信息全面性、色谱峰的响应、操作便捷性等方面考虑,确定供试品溶液最佳制备方法为加10倍量甲醇超声提取30 min。比较了4种不同流动相系统(甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.05%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水),乙腈-0.05%磷酸水作为流动相所得色谱峰形、响应及分离度均较好;采用DAD检测器对检测波长进行考察,发现在210 nm处的图谱信息较多,峰响应较高;由于样品中极性大的成分较多,优先考虑亲水性型色谱柱,分别选择Waters Atlantis T3(250 mm×4.6 mm,5μm)、Inter Sustain AQ-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)、Waters Symmetry Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm)、Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm),同一色谱条件下进样,结果表明Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱的分离效果较好,峰数量较多且分离度较好,故采用该款色谱柱

本研究建立了黄蛭益肾胶囊的指纹图谱,16批样品中确定24个共有峰,通过HPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定了化合物,并通过阳性药材和阴性制剂样品比对归属到7味药材。相似度评价结果表明16批黄蛭益肾胶囊相似度在0.925~0.995,总体上质量较为均一。但通过HCA、PCA和PLS-DA化学模式分析,16批黄蛭益肾胶囊共有峰峰面积存在差异,从而造成样品之间的质量差异。通过聚类图可知,16批样品被分为3类,结合样品批号信息,3类间的差异可能与生产时间、药品储存、原药材质量有关。以PLS-DA模型中的VIP值选出8种差异性成分,可作为控制黄蛭益肾胶囊质量的关键,这几种成分分别来自黄芪、三七、杜仲、益母草、墨旱莲,提示生产企业以后在药品生产中应该着重关注以上成分的变化以及这几味原药材的质量。

本实验操作简单,可行性高,实用性强,基于指纹图谱的基础上初步分析了药品物质基础,为黄蛭益肾胶囊所含成分的进一步分析奠定基础,为更加科学、高效地控制药品质量提供参考依据。黄蛭益肾胶囊所含药味众多,本实验指纹图谱归属到的药材仅7味,还有枸杞、薏苡仁、山药等药材成分未在此指纹图谱结果中体现,主要是由于这类药材所包含成分多为水溶性等大极性成分,色谱分离难度较大,针对此类化合物的分析后续拟采用HILIC模式进行分析。黄蛭益肾胶囊中的黄芪、牛膝、三七等药材同样包含大量皂苷类成分,此类成分在紫外中没有吸收,日后可结合蒸发光散射(ELSD)或电喷雾(CAD)检测器开展其成分分析,以期完善其成分分析。

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相关链接:甲醇色谱柱黄芪化学

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